 射频消融术诱导抗原呈递细胞浸润，增强肿瘤诱导免疫
评估次全射频（RF）消融对小鼠肿瘤模型中肿瘤特异性免疫应答的影响，并探讨肿瘤内树突状细胞（ITDCs）在其中的作用。
材料和方法：
动物模型工作根据批准的方案进行，并符合国家癌症研究所动物护理和使用委员会的指导和规定。将表达雄性次要组织相容性（HY）抗原的鼠尿路上皮癌（MB49）模型皮下接种于雌性小鼠中。14天后，用酶联免疫吸附斑点分析脾脏T细胞的HY免疫应答（n = 57）。在随后的实验中，将小鼠随机分为对照组（n = 7），RF消融组，ITDC（n = 9）和RF消融组+ ITDC（n = 9）组并监测肿瘤生长。处理后11天，取出肿瘤用于组织学和免疫组织化学分析。对于完全肿瘤消退的动物在在对侧胁腹中重新接种再次表现为完全肿瘤消退。
结果：
用次全RF消融治疗的动物显示肿瘤特异性I类和II类对HY抗原的反应和肿瘤消退的显着增加。RF消融，ITDC和联合组显示出相似水平的抗原呈递细胞浸润;与未处理的对照相比，所有组均表现出更高的浸润水平。ITDC注射也导致肿瘤消退。然而，与单独治疗相比，联合治疗并未增强肿瘤消退。与对照相比，RF消融，ITDC和联合组中的再接种小鼠表现出显着的肿瘤生长抑制。
结论：
次全RF消融治疗导致增强的全身性抗肿瘤T细胞免疫应答和肿瘤消退，其与增加的树突细胞浸润相关。ITDC注射模拟RF消融效果，但在RF消融后立即联合注射时不会增加免疫反应。
知识更新
来自尿路上皮癌的小鼠组织相容性表达细胞系的射频（RF）消融诱导全身抗肿瘤免疫应答。
射频消融引起的抗肿瘤免疫系统激活导致原发肿瘤消退，并保护治疗小鼠免受对侧肿瘤再次接种的影响。
肿瘤内树突状细胞（ITDCs）的注射引起原发肿瘤的消退。
与RF消融或单独的ITDCs相比，联合治疗（RF消融ITDCs）不能增强抗肿瘤免疫反应，消退，抗再激活或免疫组化分析
结果： 1.射频消融治疗导致全身性CD8 +和CD4 +抗肿瘤免疫应答增加
图1：（a）RF消融和（b）ITDC注射导致全身抗肿瘤免疫应答增加。在射频消融治疗，ITDCs或未治疗后14天，从每组小鼠中收集脾脏（射频消融，n = 23;无射频消融，n = 25; ITDCs，n = 5;无ITDCs，n = 4）。通过使用ELISPOT测定脾细胞的IFN-γ产生。用Wilcoxon排序和检验分析两组数据; 显示上下四分位数的中位数。（a）与未治疗的小鼠相比，单独的RF消融导致治疗小鼠中IFN-γ反应的显著增加。（b）与未处理的小鼠相比，单独的ITDC处理显示对HY抗原的反应显著增加。DBY=主要HY复合体（MHC）II类显性，RFA=RF消融，SMCY=MHCI类次优势，UTY=MHCI类显性。 未接受RF消融治疗的荷瘤小鼠对HY抗原肽反应较弱，尽管存在免疫反应但不足以控制进行性肿瘤生长。与未治疗的荷瘤小鼠相比，肿瘤的RF消融治疗导致显著更高的HY免疫应答 2.次全射频消融诱导局部DC浸润
图3：部分肿瘤消融的组织学证实。
图4：荧光显微图像显示在RF消融，ITDC和组合处理后通过使用FITC标记的CD11c抗体的免疫组织化学分析检测到CD11c +抗原呈递细胞（DC）的存在。抗原呈递细胞（绿色）。对照显示肿瘤中的抗原呈递细胞很少。相比之下，用RF消融，ITDCs和联合治疗治疗的肿瘤都显示出更高水平的CD11c染色，表明治疗导致肿瘤中的DC浸润增强。 3.ITDC注射可增强全身免疫反应 4.次全射频消融术和ITDCs诱导根除MB49肿瘤
图5：图中显示了治疗的肿瘤体积中位数，部分射频消融术和ITDC注射后12天内增强了对肿瘤生长的控制。第0天，小鼠接受射频消融术（n 9）、ITDCs（n 9）或两者（n 9）治疗，而对照组（n 7）则未进行干预。使用Kruskal-Wallis试验比较治疗组和对照组从第5天开始的肿瘤体积与基线值的显著差异。对照组的肿瘤随时间有增大的趋势，而射频消融和ITDC的肿瘤随时间一般减小。联合治疗组早期增大，然后减少。采用Hochberg方法调整P值进行的Wil-Coxon秩和检验显示，第5-12天的对照和射频消融有显著差异，而第8-12天的对照和ITDC有显著差异。对照组和联合治疗组在任何试验日均无显著差异。*p＜0.05。 5.射频消融、ITDC或联合治疗完全根除原发性肿瘤后的对侧肿瘤再接种的挑战
图6.图中显示了注射后25天内各组肿瘤体积与对照组相比的中位数。射频消融术、ITDC或联合治疗介导的肿瘤根除术后预防肿瘤复发，提示记忆效应。治疗后18天，各组原发性肿瘤根除小鼠（n=4-5）用高剂量（3×106个细胞）的mb49进行再激发；同时对单纯小鼠进行攻击作为对照（n=5）。用于显示所有数据的肿瘤体积中值的立方根。先前用射频消融术、ITDCs或两者治疗的小鼠表现出继发性肿瘤的生长和根除，而无需另外的治疗。Kruskal-Wallis和Wlicoxon秩和检验显示，在第5天单独与对照组比较时，所有三个治疗组的肿瘤体积之间存在显着差异。对于每次后续测量，所有治疗组和对照小鼠之间肿瘤体积的差异仍然显着。*P=.016 总之，我们的研究提出了一种小鼠模型，该模型允许在应用RF消融后进行免疫学研究。我们发现MB49肿瘤的部分RF消融导致扩增的肿瘤抗原特异性全身免疫应答，其与增加的DC浸润和随后的肿瘤根除相关，并且RF消融的效果可以通过使用ITDC注射来复制。从概念上讲，将RF消融治疗与ITDC相结合仍然具有吸引力，并且在这些实验中结合治疗观察到的协同作用缺乏可能是技术参数的结果。因此，未来的实验应该探索它们的协同潜力。最终，除了肿瘤的局部破坏之外，恶性肿瘤的影像引导治疗代表了改善当前免疫治疗策略的有吸引力的辅助手段。 Dromi SA, Walsh MP, Herby S, Traughber B, Xie J, Sharma KV, et al. Radiofrequency ablation induces antigen-presenting cell infiltration and amplification of weak tumor-induced immunity. Radiology. 2009 Apr;251(1):58–66.
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